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DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择(附件下载)

作者 郑州新宇化工有限公司   来源 http://www.xy-pam.com   浏览   发布时间 2014-05-26

摘要:
比较4种聚丙烯酰胺凝胶银染方法,为初次使用者选择方法时提供参考。
方法
用24mer的引物作为上样样本,分别采用氨水法、低浓度硝酸银法、0.1%及0.2%硝酸银法染色。后两种配合不同的显色剂显色,结果前两种未显色0.1%及0.2%硝酸银可显色%
结论0.2%的硝酸银与氢氧化钠显色剂相结合具有最高的灵敏度’0.2%的硝酸银与碳酸钠显色剂相结合具有最佳的显像效果。

我们选择经聚丙烯酰胺凝胶纯化的引物作为样本是为了精确定量! DNA的片断大小对检测的灵敏度具有很大的影响"当DNA片断低于5I1bp时,最大检测范围是51ng,因此选用最小上样量为5ng以判断灵敏度! 文献提及的银染法"多以乙醇或乙酸固定"由于乙酸固定后带色较浅&!I’"因此我们选用乙醇固定! 尽管文献报道认为氨水F 柠檬酸法#低浓度硝酸银法具有很大的优越性" 但我们用此* 种方法经!I 余次尝试均告失败"尚不明原因"但至少可以认为其灵敏度不够高!其中前者若改用氢氧化钠作为显色剂"可迅速显带"同时背景迅速变黄甚至呈棕色"显色速度不易控制!而后者即使延长染色时间至!14"也不能显带!

详细参加附件:DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法的选择